蘇木素-伊紅染液蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒

產品描述

蘇木素伊紅(HE)染色試劑盒蘇木素-伊紅染液綜合了多種經典的方法配制而成。該溶液無汞，可用于免疫組化復染和H＆E染色。

訂購信息

產品組分

運輸與保存

常溫運輸。常溫室溫運輸。室溫保存，有效期12個月。

使用方法

1.試劑準備

酸酒精：在100mL 70%乙醇中加入1mL 鹽酸，室溫保存。注：冰凍切片后，各種步驟（干燥，乙醇或甲醇固定，熱固定，使用帶電的或有粘性的蓋片）保證組織切片在染色過程中不脫落。

注：注意：冰凍切片后，各種步驟（干燥，乙醇或甲醇固定，熱固定，使用帶電的或有粘性的蓋片）保證組織切片在染色過程中不脫落。

2.95%乙醇：在HE染色開始前，組織切片需要固定并水化。將切片置于95%乙醇中約2min，開始水化并固定組織。

注：注意：跳過使用95%乙醇對組織進行水化和固定，并不影響形態學上的細節。

3.水化：進一步對組織切片進行水化3-~5min，并沖掉前一步殘留的乙醇。

注：注意：與第一步相似，跳過水化對于組織染色的質量非常小。

4.蘇木素：水化后，組織切片用蘇木素染色1-~3min，可根據染色結果和要求調整染色時間。蘇木素是一種基本染料，可以對細胞的酸性成分進行染色，包括核酸、粘多糖、酸性糖蛋白，將他們染成藍色或藍紫色。注：沒有蘇木素，伊紅會將組織染成亮粉紅色；顯而易見的是缺乏細胞核。組織結構很難區分，細胞內成分幾乎都不存在，難以辨別。針對上述問題，可以使用蘇木素進行復染。

(1)       染色較弱是由于：自身溶解或者固定不好；過度脫鈣；染色時間不足；過度脫色（酸與醇的比例過高或者酸乙醇脫色時間過長）；蘇木素的作用較弱（蘇木素氧化過度（過老）或水稀釋過度）；漂洗溶液的污染；切片過薄；乙醇的去除或者染色前水的漂洗不充分。

(2)       染色過度是由于：組織切片干燥；蘇木素濃度過高；染色時間過長；載玻片粘合劑過多；脫色過弱或時間不足；切片過厚；熱暴露的時間過長。

5.水洗：蘇木素染色后，用水洗組織是非常重要的。這一步以及隨后的水洗，可將多余的染料，媒染劑等去除。適當的漂洗可以去除表面金屬光澤，金屬光澤可阻止蘇木素的染色。注：跳過此步，將產生不好的結果，例如沉淀的形成，染液的稀釋，表面金屬光澤的存在。

6.酸酒精：酸酒精分色劑3-5s。在蘇木素染色方法中，組織切片有意過度染色，酸酒精將去除多余的染料以及玻片上的背景染色。

注：若省略此步驟，切片將呈暗紫色，嗜酸性結構（如膠原）不會顯現出明亮的粉紅色，導致組織結構之間難以區分，從而影響對切片的準確判斷。另外，分色過度可能是由于：酸濃度過高；脫色時間過長等。分色不足是由于：酸濃度過低；脫色時間不足；在切片上有多余的蛋白或者明膠等。

7.水洗：水洗30s，終止酸酒精反應，進一步阻止酸酒精從組織切片上將大量蘇木素去除。注：如果切片沒有經過漂洗，酸酒精可以過度脫色。如果不去除脫色劑，酸酒精將持續從組織切片上去除蘇木素。

8.自來水沖洗或用藍化液藍化：自來水沖洗3-5min，可起到發藍處理，將紫紅色的蘇木素轉變為藍紫色。通常，發藍試劑是pH依賴性的，由堿性溶液構成。因此，如果自來水作為發藍試劑，pH值的每天監控是非常重要的，因為自來水的pH值可能每天都會波動。或用藍化液藍化，30s-1min；流動的自來水沖洗5min；注：跳過發藍試劑步驟，將會導致蘇木素染液的顏色發生微妙的變化，難以區分。代替深藍色，細胞核將呈現紫色，有時甚至是紅色。細胞核不可過度藍染。如果組織染色過藍，一般是在組織切片上蘇木素過多所致。

9.水洗：為伊紅復染做準備，通過水洗30sec，將多余的發藍試劑去除。因為在堿性環境下，伊紅無法染色，水洗去除發藍試劑將允許伊紅保持其酸性pH值，使伊紅得以均勻復染。注：發藍試劑之后，如果沒有水洗，組織切片無法正確使用伊紅染色。因此，酸性結構將被染為蒼白色并且不均勻，進而導致錯誤的判斷。

10.伊紅：為了正確區分胞內結構，伊紅是出色的蘇木素復染劑。伊紅復染30-60s，可根據染色結果和要求調整染色時間。伊紅是酸性染料，可染細胞質，尤其是線粒體、分泌顆粒和膠原。它可以區分細胞內不同的細胞器以及不同的結締組織。注：使用伊紅復染組織切片的失敗，將導致組織切片的低分化。

(1)       染色較弱是由于：組織切片過薄；染色時間不足；隨后95%酒精分化過度。

(2)       染色過度是由于：染液濃度較高（可能是由于過度蒸發）；組織切片過厚；染色時間過長；隨后95%酒精分化不足。

(3)       伊紅染色未分化（一種顏色）是由于：固定不徹的底；過度染色（染色時間過長或染液濃度過高）。

11.95%乙醇：95%乙醇處理2s-1min，根據染色結果和要求調整；伊紅分化將產生不同的粉色。注：如果95%乙醇被稀釋（例如，從前一步染色中攜帶了伊紅），分化的效果較差。

12.100%乙醇：通過100%乙醇使組織切片脫色。100%乙醇處理1min；再用新的100%乙醇處理1min。注：這一步很難引起注意，若無95%乙醇，難以區分酸性結構，組織切片成為粉色。若無100%乙醇脫水，組織切片不能脫水，導致在蓋片下形成水珠。這些水珠可與下一步的二甲苯結合而形成白色混濁物，這將影響組織切片的質量。

13.二甲苯：二甲苯處理5min。在充分脫水后，二甲苯可將組織切片上的酒精去除。去除酒精后，在載玻片上加蓋玻片時，二甲苯也可作為包埋劑確保可溶解。由于有潛在的毒性，二甲苯替代品，例如檸檬烯、環烷烴也可使用。替代品可提供相同的組織染色質量，并且他們使用更安全，操作更簡單。注：當跳過此步驟時，不使用二甲苯透明，酒精將會保存于組織切片上，導致伊紅從切片上流出。

14.封片：中性樹膠封片，自然風干或烤干，顯微鏡觀察。

染色結果：細胞核染為藍色；細胞質染為紅色。

注意事項

1．       本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2．       為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3．       試劑應保存于陰涼、干燥、通風良好的環境中。

4．       第一次使用本試劑盒時建議先取1-2個樣品做預實驗。

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